肝癌耐藥細(xì)胞的建立就是體外低濃度培養(yǎng)細(xì)胞,逐漸誘導(dǎo)耐藥?？墒钦麄€(gè)過(guò)程耗時(shí)長(zhǎng),易受污染,成功率一般。后來(lái)了解到還可以通過(guò)裸鼠荷瘤的方式，給裸鼠腹腔注射藥物逐漸誘導(dǎo)耐藥，zui后取瘤組織研碎制成細(xì)胞懸液在再培養(yǎng)幾代可得腫瘤細(xì)胞。這樣時(shí)間就縮短了很多~而且不受污染等條件限制。肝癌耐藥細(xì)胞的建立實(shí)驗(yàn)是通過(guò)細(xì)胞與低劑量的藥物長(zhǎng)期接觸，引起細(xì)胞本身生物化學(xué)過(guò)程的改變，細(xì)胞膜上出現(xiàn)Pgp(或P-170)糖蛋白，使細(xì)胞逐漸對(duì)藥物耐受。
實(shí)驗(yàn)方法原理腫瘤細(xì)胞的原代培養(yǎng)與正常細(xì)胞的原代培養(yǎng)的條件基本相似。一般常用原代細(xì)胞的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，10%血清濃度即可，在原代培養(yǎng)時(shí)需加入原代細(xì)胞培養(yǎng)的特制添加物，或原患者血清(1%-2%)以利細(xì)胞生長(zhǎng)。用細(xì)胞生長(zhǎng)因子如胰島素、雌激素等等。也可以考慮動(dòng)物媒介培養(yǎng)。根據(jù)細(xì)胞種類不同選用不同的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子。
腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥是目前導(dǎo)致臨床化療失敗的主要原因，成為目前阻礙腫瘤治療的絆腳石。因此，探索腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥的原因以及如何改善腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物耐藥仍是目前研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。腫瘤細(xì)胞耐藥的產(chǎn)生是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，它的機(jī)制廣泛牽涉到藥物代謝學(xué)、病理學(xué)、生理學(xué)等多個(gè)學(xué)科，這就決定了腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥的機(jī)制是復(fù)雜的，因此體外建立肝癌耐藥細(xì)胞仍然是研究腫瘤細(xì)胞耐藥機(jī)制的重要方法。
肝癌耐藥細(xì)胞注意事項(xiàng)：
1、觀察細(xì)胞在低倍鏡(4或5X物鏡)下進(jìn)行，否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X或20X物鏡下。
2、瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請(qǐng)換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。
3、有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶?jī)?nèi)。
4、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)及時(shí)與我們。
