卵巢癌耐藥細胞的建立就是體外低濃度培養(yǎng)細胞,逐漸誘導耐藥??墒钦麄€過程耗時長,易受污染,成功率一般。后來了解到還可以通過裸鼠荷瘤的方式,給裸鼠腹腔注射藥物逐漸誘導耐藥,取瘤組織研碎制成細胞懸液在再培養(yǎng)幾代可得腫瘤細胞。這樣時間就縮短了很多~而且不受污染等條件限制。卵巢癌耐藥細胞的建立實驗是通過細胞與低劑量的藥物長期接觸,引起細胞本身生物化學過程的改變,細胞膜上出現(xiàn)Pgp(或P-170)糖蛋白,使細胞逐漸對藥物耐受。
卵巢癌耐藥細胞通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的培養(yǎng)物稱為耐藥細胞,卵巢癌耐藥細胞是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。卵巢癌耐藥細胞的特殊性質或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后即為細胞系,由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代,或傳代次數(shù)有限,可稱為有限細胞系,如可以連續(xù)培養(yǎng),則稱為連續(xù)細胞系,培養(yǎng)50代以上并無限培養(yǎng)下去。所以卵巢癌耐藥細胞是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得的具有特殊性質或標志的培養(yǎng)細胞。從培養(yǎng)代數(shù)來講,可培養(yǎng)到40-50代。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限,稱為有限細胞株;如果可以連續(xù)傳代,稱為連續(xù)細胞株。對于人類腫瘤細胞,在體外培養(yǎng)半年以上,生長穩(wěn)定,并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。
卵巢癌耐藥細胞注意事項:
1、觀察細胞好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,否則不能準確判斷細胞的傳代密度??醇毎男螒B(tài)請在10X或20X物鏡下。
2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基,細胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。
3、有些細胞貼壁不牢,如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落,可離心吹打后接種到新瓶內。
4、收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請及時與我們。