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人結(jié)腸癌紫杉醇耐藥株的傳代方法介紹
更新時(shí)間:2016-08-26 點(diǎn)擊次數(shù):1272次
  
  
  人結(jié)腸癌紫杉醇耐藥株傳代方法:
  
  收到細(xì)胞后,在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個(gè)人結(jié)腸癌紫杉醇耐藥株生長(zhǎng)情況。
  
  (一)如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,換10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。
  
  (二)如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:
  
  1.棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
  
  2.加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,倒放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,之后翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶10-30秒,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化。
  
  3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加*培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出一半,分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒(méi)有特別說(shuō)明,收到細(xì)胞后的*次傳代一般是一傳二。
  
  注:1、觀察細(xì)胞在低倍鏡(4或5X物鏡)下進(jìn)行,否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度??醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X或20X物鏡下。
  
  2、瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請(qǐng)換用加雙抗的新培養(yǎng)基,細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。
  
  3、有些細(xì)胞貼壁不牢,如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落,可離心吹打后接種到新瓶?jī)?nèi)。
  
  4、收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)及時(shí)與我們。